體外診斷是指在人體之外,通過(guò)對人體樣本(血液、體液、組織等)進(jìn)行檢測而獲取臨床診斷信息,進(jìn)而判斷疾病或機體功能的產(chǎn)品和服務(wù)。而檢測人體樣本的關(guān)鍵步驟之一,即是樣本中的核酸(DNA和RNA)純化。核酸提取純化的方法是影響所提取核酸質(zhì)量的重要因素,只有高質(zhì)量的核酸才能滿(mǎn)足下游的各種應用。
核酸是分子生物學(xué)的基礎,而核酸提取是核酸檢測乃至于整個(gè)分子行業(yè)繞不過(guò)去的門(mén)檻,很多時(shí)候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測結果的有效性。核酸提取為大量廣泛研究和應用提供了答案(如克隆、qRT-PCR和全基因組、轉錄組范疇中的二代測序技術(shù)),獲得的核酸可以多種方式進(jìn)行應用。
準確的研究目的決定了要提取的核酸類(lèi)型;核酸的應用往往影響提取方法的選擇。為確定理想的研究方法,有必要清楚了解核酸的下游應用以及任何與樣品類(lèi)型相關(guān)的潛在限制(如臨床樣品采集量往往有限,核酸提取存在挑戰)。
雖然依據樣品類(lèi)型,細胞裂解方式不同,但整體的核酸提取核心原則不變:細胞或組織樣品裂解,去除非核酸污染物(蛋白質(zhì)等等)。
核酸提取純化的主要原則和要求如下:
1.保證核酸一級結構的完整性;
2.排除其它分子的污染(如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾);
3.核酸樣品中不存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子;
4.其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染應降到低程度;
5.排除其它核酸分子的污染,如提取DNA分子時(shí)應去除RNA,反之亦然。